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水产品中氯霉素的测定

时间:2020-12-23 

  水产物中氯霉素的测定_水产渔业_农林牧渔_专业材料。XXX 尝试室检测中央 约束体例文献 功课指挥书 (第 A 版 第 0 次修正) 文献编号: 编写: 审核: 容许: 容许日期: 受控状况:□ 受控 正副版本:□ 原本 持有者: □ 非受

  XXX 尝试室检测中央 约束体例文献 功课指挥书 (第 A 版 第 0 次修正) 文献编号: 编写: 审核: 容许: 容许日期: 受控状况:□ 受控 正副版本:□ 原本 持有者: □ 非受控 □ 副本 宣告日期: 推行日期: 功课指挥书 标 题:水产物中氯霉素的测定 文献编号: 第1页 共4页 第 A 版 第 0 次修正 发布日期:年月日 1.方针 使氯霉素的测定处于受控状况,保障氯霉素检测结果实在凿性与同等性;模范参预本项目 检测职业职员的操作规程。 2.实用畛域 实用于水产物中氯霉素残留量的筛选检查。 3.援用程序 《动物源食物中氯霉素残留检测 酶联免疫吸附法》农业部 1025 号告示-26-2008 《氯霉素酶联免疫检测试剂盒仿单》 广州瑞森生物科技有限公司 《无公害食物 水发水产物》 NY 5172-2002 《领会尝试室用水规格和试验方式》GB/T 6682-2008 《食物卫生检查方式 理化部门 总则》 GB/T5009.1-2003 4.概述 氯霉素属广谱抗生素,曾正在畜牧业中广为使用。但氯霉素有较强的副影响和毒性影响,倘若 氯霉素正在食用动物中残留,可通过食品链传给人类,历久微量摄入氯霉素,不只使人体肠道寻常 菌群失调,况且还会惹起众种疾病,对人类的强壮酿成危急。全邦上很众邦度禁止此药用于临盆 食物动物,并轨则了正在畜产物中氯霉素不得检出。 5.测定 5.1.道理 氯霉素酶联免疫检测试剂盒,要紧是运用抗原与抗体的特异性免疫化学反响的根基道理来进 行的,换句话说,即是运用酶标志物与样品中的氯霉素与微孔中的抗体举办角逐反响。正在总共反 该当中,倘若样品中的氯霉素残留的越众,相对地就会角逐反响越众的酶标志物,使得能连合上 抗体的酶标志物相对地裁减,用 TMB 底物显色,样品中的氯霉素含量与样品的吸光度值呈反比, 与程序弧线比力即可得出氯霉素含量。 5.2.仪器 5.2.1.酶标仪(装备 450nm 滤光片)。 5.2.2.扭转蒸发仪。 5.2.3.匀浆器。 5.2.4.振荡器。 5.2.5.冷冻离心思。 5.2.6.微量移液器:单道 20μ L、50μ L、100μ L、1000μ L;众道 250μ L。 5.2.7.天平:感量 0.01g。 5.2.8.氮气吹干安装。 功课指挥书 标 题:水产物中氯霉素的测定 文献编号: 第2页 共4页 第 A 版 第 0 次修正 发布日期:年月日 5.3.试剂和质料 以下整个试剂,均为领会纯试剂;水为适当 GB/T 6682 轨则的二级水。 5.3.1.乙酸乙酯。 5.3.2.乙腈。 5.3.3.正己烷。 5.3.4.0.5N 盐酸溶液 5.3.5.0.5N 氢氧化钠溶液 5.3.6.氯霉素酶联免疫试剂盒:2℃~8℃冰箱中保留。 5.4.样本管制 a) 将 3 克已均质的样品放入 15mL 离心管中,再到场 6mL 乙酸乙酯,颠簸 5 分钟。 b) 用离心思离心 1700×g10 分钟,取 2mL 上层液(乙酸乙酯)至 10mL 玻璃管中,于 50℃下,利 用氮气将有机溶剂吹干。 c) 正在此玻璃管中到场正己烷 1mL,先将渣滓物全部溶化后,再到场 1mL 样品稀释液,颠簸 30 秒钟。 d) 用离心思离心 1700×g 10 分钟,运用吸管吸去包罗中问乳化层部门的上层液(正己烷),再 罗致基层液(水层)备用。 稀释倍数:1 若待测物为白虾可按以卑劣程将样品做 8 倍浓缩以填充检品敏锐度 a) 将 6 克已均质的样品放入 15mL 离心管中,再到场 6mL 乙酸乙酯,颠簸 5 分钟。 b) 用离心思离心 1700×g 10 分钟,取 4mL 上层液(乙酸乙酯)至 10mL 玻璃管中,于 50℃下,利 用氮气将有机溶剂吹干。 c) 正在此玻璃管中到场正己烷 2mL,先将渣滓物全部溶化后,再到场 0.5mL 样品稀释液,颠簸 30 秒钟。 d) 用离心思离心 1700×g 10 分钟,运用吸管吸去包罗中问乳化层部门的上层液(正己烷),再 罗致基层液(水层)备用。 稀释倍数:0.125 5.5.酶联免疫测定 5.5.1.将程序品对应微孔按次编号后分离分离到场 100μ L 氯霉素程序溶液。 5.5.2.正在其他的微孔到场 100μ L 已实行前管制的样品溶液。 5.5.3.再于每一微孔另到场 50μ L 已全部回温的酶标志物。 5.5.4.轻敲酶标板边际,使其敷裕搀杂后于室温下避光静置 1 小时。 5.5.5.将微孔中的反响液甩掉,再将已稀释洗濯液加满每一微孔后甩掉,反复 3 次。 5.5.6.最终一次甩掉洗濯液后,正在吸水纸上拍干。 5.5.7.于每一微孔到场显色液 100μ L 后,轻敲酶标板边际,使其敷裕搀杂。 5.5.8.于室温下避光静置 20 分钟。 5.5.9.到场反响终止液,每一微孔到场 100μ L。 5.5.10.酶标仪以单波长 450nm 或双波长 450nm/650nm 读值。 功课指挥书 标 题:水产物中氯霉素的测定 文献编号: 第3页 共4页 第 A 版 第 0 次修正 发布日期:年月日 5.6.结果决断 5.6.1.定性决断 用样品的均匀吸光度值与程序值比力即可得出样本所含氯霉素浓度畛域(ng/ml)。 假设样品 1 的吸光度值为 0.313, 样品 2 的吸光度值为 1.032, 程序液吸光度值分离是:0ppb 为 1.892; 0.025ppb 为 1.501;0.05ppb 为 1.175;0.1ppb 为 0.751;0.3ppb 为 0.421;0.6ppb 为 0.198。则样品 1 的浓度畛域 0.3ppb-0.6ppb;样品 2 的浓度畛域 0.05ppb-0.lppb。(再乘以相应的稀释倍数) 5.6.2.定量决断 所获取的每个浓度程序溶液和样本吸光度值的均匀值(B)除以第一个程序(0 程序)的吸光度 值(BO)再乘以 100%,即百分吸光度值。 B 百分吸光度值 % = × 100% B0 B—程序溶液或样本溶液的均匀吸光度值。 BO—0ng/ml 程序溶液的均匀吸光度值。 以程序品百分吸光率为纵坐标,以氯霉素程序品浓度(ng/ml)的半对数为横坐标,绘制程序 弧线图。将样本的百分吸光率代入程序弧线中,从程序弧线上读出样本所对应的浓度,乘以其对 应的稀释倍数即为样本中氯霉素的实践浓度。 若运用试剂盒专业领会软件举办揣度,更便于大方样品实在凿、急速领会。 6.检测方式聪敏度、确凿度、精细度 6.1.聪敏度 本方式正在鱼、虾、蟹样品中氯霉素的检出限为 0.025ppb。 6.2.确凿度 本方式的接受率为 70%~130%。 6.3.精细度 本方式样本的变异系数小于 10%。 7.合系文献 氯霉素酶联免疫检测试剂盒仿单(广州瑞森生物科技有限公司) 酶标仪操作规程 扭转蒸发仪操作规程 匀浆器操作规程 振荡器操作规程 冷冻离心思操作规程 氮吹仪操作规程 天平称量操作规程。 功课指挥书 标 题:水产物中氯霉素的测定 文献编号: 第4页 共4页 第 A 版 第 0 次修正 发布日期:年月日 8.属意事项 1) 应用前请先将试剂盒回温至室温(置于室温 60 分钟以上),各溶液皆摇匀后方可应用。 2) 回温后,取出所需酶标板条,将盈利未测的 ELISA 孔条立时放回铝箔袋中,置于 4℃保留。 3) 10 倍样品稀释液与 10 倍洗濯液请用蒸馏水稀释 10 倍方可应用。(如 1mL 浓缩稀释液加 9mL 蒸馏水)稀释后的 1×萃取稀释液和 1×洗濯液可于 4℃保留一周。 4) 萃取流程请应用 P.P.材质的 15mL 离心管省得腐化。 5) 反响终止液含 0.5 N HCl,请小心操作。 6) 氯霉素程序溶液含氯霉索,请小心操作。 7) 本试剂盒的整个试剂出厂前均做过完全的测试,请应用试剂盒供给的药品及试剂,勿随便更 换。 8) ELISA 所得的氯霉索浓度若低于该样品检品敏锐度即可视为该样品配景值,无须回乘稀释倍 数。反之若所得的氯霉索浓度若高于该样品检品敏锐度,即可以为氯霉索阳性样品,倡议使 用其它检测方式检测,如 GC/MS 等。

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